Modificação do Método de Dosagem de Fosfato de Heinonen & Lahti (1981)

Resumo

Heinonen & Lahti (1981)1,2 publicaram um método colorimétrico para dosagem de fosfato inorgânico que é até hoje padrão para estudos de enzimas que realizam a hidrólise de ATP, como ATPases, por exemplo. O método consiste em uma solução de acetona P.A, ácido sulfúrico 5N e molibdato de amônio 10 mM numa proporção de 2:1:1. A aquisição de acetona P.A., mesmo para instituições de ensino e pesquisa, é controlada pela polícia federal, uma vez que pode ser utilizado no refino de cocaína. Sendo assim, este trabalho buscou analisar a substituição da acetona P.A. por álcool etílico P.A., uma vez que se trata de um
reagente de fácil aquisição. A solução de álcool etílico P.A., ácido sulfúrico 5N e molibdato de amônio 10 mM na proporção de 7:2:1 foi mais sensível que a solução do método original, mostrou linearidade para concentrações de fosfato inorgânico de até 400mM, produziu uma cor estável por cerca de 2 horas e não sofreu influência estatisticamente significante por outros reagentes utilizados em análises bioquímicas, como Triton X-100 1%, Tween 1%, EDTA 5mM, EGTA 5 mM, Imidazol 20 mM, Triz 20 mM, CAPS 20 mM, HEPES 18,75 mM, BSA 0,5 mg/mL, KCl 1M e NaCl 1M. Assim, o método de Heinonen e Lahti (1981)1,2
modificado para o uso de álcool etílico na proporção de 7:2:1 se mostrou capaz de substituir com eficácia o método original, proporcionando resultados tão confiáveis quanto o método original com a facilidade da compra do reagente.