Imobilização Covalente na Superfície de Sílica Gel da Enzima β-1,3-Glucanase Produzida por Trichoderma Harzianum
Resumo
Neste trabalho, o suporte utilizado para imobilizar a enzima β-1,3-glucanase foi a sílica gel (ΞSi-OH) com área superfi cial (SBET) de 466,0 m2 .g-1, volume (V) e diâmetro médio de poros (Ď) de 0,803 cm3 .g-1 e 6,89 nm, respectivamente. A sílica foi modifi cada via reação de silanização com os grupos 3-aminopropiltrimetoxisilano (ΞSi-NH2 ), seguida de funcionalização com glutaraldeído (G) (2,5% v/v) (ΞSi-NH-G). A enzima β-1,3- glucanase (extrato bruto) produzida por Trichoderma harzianum, na concentração de 0,069 mg.cm-3 de proteína total, foi imobilizada covalentemente ao suporte funcionalizado com glutaraldeído (ΞSi-NH-G-Enzima), obtendo-se 0,512 mg de proteína imobilizada por grama de ΞSi-NH-G. Os ensaios enzimáticos de atividades específi cas forneceram 2,30 U.mg-1 para a enzima imobilizada e de 1,88 U.mg-1 para a enzima livre.
Referências
2. Fernandes, K.F., Lima,C.S., Lopes, F.M. Técnicas de Imobilização de Enzimas. Revista Processos Químicos, 2010.
3. Hartemeier, W. Immobilized Biocatysts – na Introdution, Trans. J. Wieser, Berlin, Springer-Verlag, 1988.
4. Kirk, O., Borchert, T.V. & Fuglsang, C.C. Industrial enzyme application. Current opinion in biotechonology, vol.13 n0 4, 345-351, 2002.
5. Fernandes, K. F. Imobilização de Horseradish Peroxidase em Diferentes Polianilinas: Aplicações Analíticas. Tese de Doutorado, Universidade Estadual de Campinas, 2000.
6. Cardoso, C. L.; Moraes, M. C. DE; Cass, Q. B. Imobilização de Enzimas em Suportes Cromatográfi cos: uma Ferramenta na Busca por Substâncias Bioativas, Química Nova, v. 32, n. 1, p. 175-187, 2009.
7. Mendes, A. A.; Oliveira, P. C. DE; Castro, H. F. DE; Giordano, R. L. C. Aplicação de Quitosana como Suporte para a Imobilização de Enzimas de Interesse Industrial, Química Nova, No Prelo.
8. Alfaya, A. A. S.; Kubota, L. T. A Utilização de Materiais Obtidos pelo Processo de Sol-Gel na Construção de Biossensores, Química Nova, v. 25, n. 5, p. 835-841, 2002.
9. Unger, K.K. Porous Silica, Elsevier. Amsterdam – New York, 1979.
10. Iler, R.K. The Chemistry of Silica, Jonh Wiley & Sons, New York, 1979.
11. Scott, R.P.W. & Traiman, S.J. Chromatogr., 196: 193, 1980.
12. Frye, J.S.; Hawkins, B.L. & Maciel, G.E. J. Catal., 98: 444, 1986.
13. Vrancken, K.A.; Possemiers, K.; Voort, P. & Vansant, E.F. Surface modifi cation of silica gels with aminoorganosilanes. J. Colloid Interface Sci. 235-241, 1994.
14. Cestari, A.R. & Airold, C., Thiol-Anchored silica and its oxidized form- Some divalent cations chemsorbed in aqueous and nonaqueous solvents. J. Braz. Chem. Soc., vol.6, n0 3, 291-296, 1995.
15. Vogel, A.I. Química Orgânica, vol. 1, 3a Ed. Livro Técnico S.A. e EDUSP, Rio de Janeiro, 1971.
16. Lowry, O.H.; Rosebrough, N.; Farr, A. & Randall, R. Protein measurement with the Folin phenol reagent. J. Biol. Chem. 193: 265-275, 1951.
17. Airoldi, C. & Alcântara, E.F.C. Silica gel immobilized acetylacetone – some thermodynamic data in non-aqueous solvents, Thermochim Acta, 259: 95-102, 1995.
18. Arica, M.Y. & Hasirci, V. Immobilization of glucose oxidase: A comparison of e entrapment and covalente bonding. J. Chem. Tech. Biochnol. 58: 287-292, 1993.
19. Uhlich, T; Uhlich, M. & Tomaschewski, G. Immobilization of enzyme in photochemically cross-linked polyvinyl alcohol. Enzyme Microb. Technol. 19: 124-131, 1996.
20. Arica, M.Y.; Alaeddinoglu, N.G. & Hasirci, V. Immobilization of glucoamylase onto activated pHEMA/EGDMA microspheres: properties and application to a packed-bed reactor. Enzyme Microb. Technol. 22: 152-155, 1998.
21. Cabral, J.M.S.; Kennedy, J.F. & Novais, J.M. Investigation of the operation stabilities and kinetics of glucoamylase immobilized on alkylamine derivatives of titanium (IV) – activated porous inorganic supports. Enz. Microb. Technol. 4: 343-348, 1982.
22. Ramon, O.; Kupiec-Conhen, R. & Chet, I. Regulation of β-1,3-glucanases by carbon starvation in the mycoparasite Trichoderma harzianum. Mycol. Res. 104 (4): 415-420, 2000.
23. Kazan, D.; Ertan, H. & Erarslan, A. Stabilization of Escherichia coli penicillin G acylase against thermal inactivation by crosslinking with dextran dialdehyde polymers, Appl. Microbiol. Biotechnol., 48: 191-197, 1997.
24. Mohamed, A. & Abdel, N. Immobilization of Paenibacillus macerans NRRL B-3186 cyclodextran glucosytransferase and properties of the immobilized enzyme, Process Biochem. 34: 399-405, 1999.
25. Oh, J.O. & Kim, J.H. Preparation and properties of immobilized amyloglucosidase on nonporous PS/PnanSS microspheres, Enzyme Microb. Technol. 27: 356-361, 2000.
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